本试剂是T4 DNA连接酶为主体的高效率单管型连接试剂。广泛地应用于各种DNA末端的连接反应。通过对原产品进行改良,可简便地用于各种用途。
| LGK-201 | 750μl×1支 | RMB 750 | -20℃ |
特征
1. 高效率
TA克隆效率得到了大幅度的提高。下图是使用本产品与其他公司试剂盒获得的TA克隆效率比较。
2. 即便在-20℃条件下保存也不会冻结
由于本产品在-20°C状态下也不会冻结，因此从-20℃冷冻柜中取出后可立即使用，非常节省时间。下面的照片为-20°C保存下的试剂状态。
3. 简便的单管型
使用方法与原有产品一样，只要将试剂和DNA片段混合即可，非常简便。
1.DNA末端形状与连接效率的关系
在16℃条件下反应时，将DNA片段（0.5kb）的克隆效率与末端形状进行比较。结果可见，突出末端的连接约5分钟即可完成，而平滑末端及TA克隆30分钟约完成70〜80%。另外，平滑末端克隆及TA克隆时间超过1小时，到2小时为止，连接效率会逐渐提高。因此当克隆效率比较低时，可将反应时间提高至2小时左右可提高连接效率。 |  |
2.使用未经纯化的PCR产物的TA克隆
将T载体（50ng, 25fmol）和具有良好扩增效率的未纯化PCR产物（用Taq DNA polymerase扩增的0.5kb片段）按照各种比例混合，在该DNA溶液〈7.5μl〉中添加Ligation high Ver.2〈7.5μl〉，在16℃条件下反应30分钟。然后，用10μl反应液对E. coli DH5α感受态细胞〈100μl〉进行转化，用LB/Amp（X-Gal）培养基培养后点克隆数。结果可见，尽量少带入PCR反应液可得到良好的结果。 由于用纯化后的DNA片段可得到高效率，因此当效率低下时，可使用纯化后的PCR产物。 |
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