KOD-Plus

用途

PCR

说明

本产品是以KOD DNA polymerase为基础开发的高保真性

PCR用酶。在本公司的PCR酶中保真性最高。本酶通过

对Buffer组分的改良及采用热启动方法,与原来的产品

KOD DNA polymerase相比,保真性、PCR效率有了

非常显著的提升。KOD -Plus- Ver.2由于对KOD -Plus-

的Buffer进行了进一步的改良,PCR成功率更高。

特征

●优良的保真性(本公司同类产品中为第一)

KOD DNA polymerase的特点是具有非常高的保真性,而KOD –Plus-的保真性有了更大的提高。大约为Taq DNA polymerase的80倍。最适用于克隆。

●通过热启动提高了PCR反应效率
通过将2种抗KOD单克隆抗体预混在酶中,抑制了常温状态下的多聚酶活性(该活性是产生非特异性反应的主要原因)和3'→5'核酸外切酶活性。抗体在PCR的预变性步骤即发生失活,对扩增反应没有任何影响。


●延伸性・扩增效率的提高
对反应Buffer的组分进行了优化,使之较以往的KOD DNA Polymerase延伸性・扩增效率均有很大的提高。

●超群的耐热性
因其耐热性比Taq DNA Polymerase更为优良,故可以将热变性步骤的温度设定值提高,对GC含量高,容易形成高级结构的目的片段尤其适用。

●高PCR成功率【KOD -Plus- Ver.2】
对难扩增的目的片段、长目的片段的PCR成功率比KOD -plus-更高。另外,也降低了带入的逆转录反应液对PCR反应的抑制。

产品内容

【KOD-201】
KOD -Plus-(1U/μl)*200μl ×1支
10×PCR Buffer [KOD-2B]1.0ml ×1支
25mM MgSO4 [KOD-2S]1.0ml ×1支
2mM dNTPs [NTP-201]1.0ml ×1支

【KOD-211】
KOD -Plus-(1U/μl)*200μl ×1支
10× PCR Buffer [KOD-3B]1.0ml ×1支
25mM MgSO4 [KOD-2S]1.0ml ×1支
2mM dNTPs [NTP-201]1.0ml ×1支

*含有1.6μg/μl 浓度的KOD抗体。

组分:
50mM   Tris-HCl(pH8.0)
0.1mM  EDTA
1mM     DTT
50%      Glycerol
0.001%  Tween® 20
0.001%  Nonidet® P-40

活性的定义:
在75℃活性测定条件下,在30分钟内摄入10nmoles的全核苷酸使成为酸不溶物时所需酶的活性定义为1U。

来源:
E.coli 重组体

基本反应条件

〈KOD -Plus-〉
10×PCR Buffer(KOD -Plus-用)5μl
25mM MgSO42μl(1mM)
各Primer15pmoles each
2mM dNTPs5μl(0.2mM)
模板1〜50ng(Plasmid)
10〜200ng(Genomic DNA)
〜1μl(逆转录反应液)
KOD -Plus-(1U/μl)1μl(1U)

Total Volume50μl

< 3 Step Cycle >*
94℃        2min.
        ↓
94℃        15sec.
Tm-5℃    30sec.

68℃    1min./kb    25〜35 cycles

< 2 Step Cycle >*
94℃        2min.
        ↓
94℃        15sec.

68℃        1min./kb    25〜35 cycles

〈KOD -Plus- Ver.2〉
10×PCR Buffer(KOD -Plus- Ver.2用)5μl
25mM MgSO43μl(1.5mM)
各Primer15pmoles each
2mM dNTPs5μl(0.2mM)
模板1〜50ng(Plasmid)
10〜200ng(Genome DNA)
〜2μl(逆转录反应液)
KOD -Plus-(1U/μl)1μl(1U)

Total Volume50μl

< 3 Step Cycle >*   
94℃        2min.
        ↓
98℃        10sec.
Tm-5℃    30sec.

68℃        1min./kb    25〜40 cycles

< 2 Step Cycle >*
94℃        2min.
        ↓
98℃        10sec.

68℃        1min./kb    25〜40 cycles

*通常用3步法进行扩增。

引物的Tm值在72℃以上时,如果用3步法循环出现smear现象,改用2步法循环有时会改善。

※Tm值采用最邻近法(Nearest Neighbor method)计算得到的值。引物的Tm值以及扩增产物的Tm值计算请点击此处进入在线工具

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