ReverTra Ace -α-®

用途

RT-PCR用cDNA的合成

说明

本试剂盒使用的逆转录酶ReverTra Ace®属于在高温反应性和反应效率方面进行了提高的改良型M-MLV RTase(RNaseH-),与以往的RTase相比,可以合成更长的cDNA(已确认到可以合成cDNA长度最长可达14kb)。

特征

●高效率

使用高效率逆转录酶「ReverTra Ace®」,可以高效率地合成cDNA。

●应用范围广

可用于使用Random Primer、Oligo dT Primer以及Specific Primer的各种逆转录情况。

●确证

因含有阳性对照(positive control),可在确证各步骤的同时推进实验进展。

实验例

使用ReverTra Ace -α-®以HeLa Total RNA(1μg)为模板,进行cDNA的合成后,使用各种PCR酶,以β-actin(838bp)为目的片段进行PCR反应。cDNA合成反应是在20μl的反应体系中,42℃下反应20min.,接着99℃进行5min的失活处理。然后,向合成的cDNA反应液中加入80μl的PCR溶液,使总体系达100μl,进行PCR反应。

结果显示,所有的酶都确认有扩增,ReverTra Ace -α-®的逆转录产物可适用于各种PCR酶的扩增反应。

产品内容

ReverTra Ace®100μl
5×RT Buffer*〔TRT-1B〕400μl
Random Primer〔FSK-301〕100μl
Oligo(dT)20 Primer 〔FSK-201〕100μl
10mM dNTPs〔NTP-301〕200μl
RNase Inhibitor100μl
RNase Free H2O1.2ml


*5×RT Buffer与ReverTra® Ace用的Buffer组分相同。

基本反应条件

〈cDNA合成〉
灭菌蒸馏水Xμl
模板RNA
100-1000ng total RNA
10-100ng mRNA
Primer
1μl Oligo(dT)20 Primer
1μl Random Primer
10pmoles* Specific Primer
5×RT Buffer4μl
10mM dNTPs2μl
ReverTra Ace®1μl
RNase Inhibitor1μl

Total Volume20μl

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